| 凝胶色谱技术是六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经被生物化学、分子生物学、生物工程学、分子免疫学以及医学等有关领域广泛应用，不但应用于科学实验研究，而且已经大规模地用于工业生产。据下图回答问题： |
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| (1)a、b均为蛋白质分子，其中先从层析柱中洗脱出来的是_________，原因是__________。 (2)自己制作凝胶色谱柱时，在色谱柱底部d位置相当于多孔板的结构可由________替代。 (3)装填凝胶色谱柱时，色谱柱内不能有气泡存在，原因是__________。 (4)洗脱用的液体应尽量与浸泡凝胶所用的液体_________(填“相同”或“不同”)，洗脱时，对洗脱液的流速要求是______________。 |
| 相对分子质量不同的蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中哪一个？ |
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A． B．  C．  D．  |
| 凝胶柱的制作常用玻璃管，在选择玻璃管时应该考虑的因素有 ①玻璃管的高度 ②玻璃管的直径 ③样品的体积 ④缓冲溶液的pH |
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| A．①②③ B．②③④ C．①②④ D．①③④ |
| 下列各项中，一般不影响在凝胶色谱法分离蛋白质中的分离度的是 |
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| A．层析柱高 B．层析柱的直径 C．缓冲溶液 D．样品的分布 |
| 蛋白质分子中，氨基酸的α-氨基和α-羧基虽然大部分结合成为肽键，但是蛋白质分子内仍含有各种酸性基团和碱性基团，如肽链末端的α-氨基和α-羟基、天冬氨酸和谷氨酸残基中的羟基、赖氨酸和组氨酸残基中的各种碱性基团，所以蛋白质是两性电解质。在酸性溶液中，碱性基团的解离增大，使蛋白质带正电荷；在碱性溶液中，酸性基团的解离加强，使蛋白质带负电荷。当溶液到达某一pH时，蛋白质可因内部酸性和碱性基团的解离相等而呈等电状态，这时的溶液pH叫做蛋白质的等电点。不处于等电点状态的蛋白质分子的正、负电荷量是不相同的。试回答下列问题： (1)多数蛋白质的等电点近于5，一般含碱性基团较多的蛋白质的等电点______(填“偏高”或“偏低”)。 (2)根据等电点的不同，你能用____方法将不同种类的蛋白质分子分开。 (3)简述根据等电点分离不同种类的蛋白质分子的原理。 |
| 下列各项中，哪项不是电泳使样品中各分子分离的原因？ |
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| A．带电性质差异 B．分子的大小 C．分子的形状 D．分子的变性温度 |
| 利用凝胶色谱法，什么样的蛋白质先洗脱出来？ |
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| A．相对分子质量大的 B．溶解度高的 C．相对分子质量小的 D．所带有的电荷多的 |
| 下列试剂可用于血红蛋白释放的是 ①0.9%的生理盐水 ②甲苯 ③磷酸缓冲液 ④蒸馏水 ⑤柠檬酸钠 |
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| A．②④ B．①④ C．④⑤ D．①③ |
| 蛋白质的提取和分离的步骤可分为 |
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| A．样品处理、凝胶色谱操作、SDS―聚丙烯酰胺凝胶电泳 B．样品处理、凝胶色谱操作、纯化 C．样品处理、粗分离、纯化、纯度鉴定 D．样品处理、纯化、粗分离、纯度鉴定 |
| 根据蛋白质的各种特性的差异，可以用来分离不同的蛋白质，下列正确的是 |
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| A．分子的大小、形状和溶解度 B．所带电荷的性质和多少、吸附性质 C．对其他分子的亲和力 D．以上三项都正确 |
| 随着人类跨入蛋白质组时代，对蛋白质的研究和应用越来越深入，首先要做的一步是 |
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| A．弄清各种蛋白质的空间结构 B．弄清各种蛋白质的功能 C．弄清各种蛋白质的合成过程 D．获得高纯度的蛋白质 |
| 洗涤红细胞时，分离所用方法为 |
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| A．低速长时间离心 B．低速短时间离心 C．高速长时间离心 D．高速短时间离心 |
| 关于血红蛋白分子组成的叙述正确的是 |
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| A．两条α-肽链、两条β-肽链、一个亚铁血红素基团 B．一条α-肽链、三条β-肽链、四个亚铁血红素基团 C．两条α-肽链、两条β-肽链、四个亚铁血红素基团 D．两条α-肽链、两条β-肽链、两个亚铁血红素基团 |
| 在血红蛋白的整个提取过程中，不断用磷酸缓冲液处理的目的是 |
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| A．防止血红蛋白被氧气氧化 B．血红蛋白是一种碱性物质，需要磷酸中和 C．磷酸缓冲液会加速血红蛋白的提取过程 D．让血红蛋白处在稳定的pH范围内，维持其结构和功能 |
| 下列叙述中正确的是 |
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| A．不同类型的凝胶吸水量不同，凝胶膨胀体积的倍数也不同 B．不同类型的凝胶膨胀所需的时间不同 C．若凝胶中含有空气、细菌等不影响分离度 D．可以用高温、高压的方法来加速凝胶的膨胀 |
| 下列关于蛋白质提取和分离实验中样品处理步骤的描述，正确的是 |
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| A．红细胞的洗涤：加入蒸馏水，缓慢搅拌，低速短时间离心 B．血红蛋白的释放：加入生理盐水和甲苯，置于磁力搅拌器上充分搅拌 C．分离血红蛋白：将搅拌好的混合液离心，过滤后，用分液漏斗分离 D．透析：将血红蛋白溶液装入透析袋，然后置于pH为4.0的磷酸缓冲液中透析12h |
| 红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带O2或CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白，请回答下列有关问题： (1)血红蛋白提取和分离的程序可分为四步：______、______、______和______。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。 ①．加入柠檬酸钠的目的是________。 ②．以上所述的过程即是样品处理，它包括红细胞洗涤、_______、分离血红蛋白溶液。 ③．洗涤红细胞的目的是________，你如何知道红细胞已洗涤干净？_________。 ④．分离红细胞对离心速度及离心时间的要求分别是__________________。 ⑤．如若离心速度过高和时间过长结果会怎样？_______________________。 |
| 下列关于血红蛋白的叙述中正确的是 |
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| A．血红蛋白属于内环境的组成成分 B．血红蛋白包括三条α-肽链和一条β-肽链 C．血红蛋白因含有血红素而呈现红色 D．控制每条肽链的基因都相同 |
| 凝胶色谱法分离蛋白质依据的是 |
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| A．蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小 B．蛋白质相对分子质量的大小 C．蛋白质所带电荷的多少 D．蛋白质溶解度的大小 |
| 将经处理后的红细胞的混合液以2000r/min的速度离心10min后，离心管中的溶液分为四层，从上到下的顺序依次是 |
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| A．血红蛋白、甲苯层、脂类物质层、沉淀层 B．甲苯层、沉淀层、血红蛋白、脂类物质层 C．脂类物质层、血红蛋白、甲苯层、沉淀层 D．甲苯层、脂类物质层、血红蛋白、沉淀层 |
| 凝胶色谱法分离蛋白质时，凝胶的种类较多，但其作用的共同点是 |
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| A．改变蛋白质分子通过凝胶时的路径 B．吸附一部分蛋白质，从而影响蛋白质分子的移动速度 C．将酶或细胞固定在凝胶中 D．与蛋白质分子进行化学反应，从而影响其移动速度 |
| SDS―聚丙烯酰胺凝胶电泳法中加入SDS的作用是 |
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| A．增大蛋白质的相对分子质量 B．改变蛋白质分子的形状 C．掩盖不同蛋白质分子间的电荷差别 D．减小蛋白质分子的相对分子质量 |
| 常见用于纯化蛋白质的电泳方法是？ ①琼脂糖凝胶电泳 ②聚丙烯酰胺凝胶电泳 ③高压盐溶液电泳 ④氰化腈电泳 |
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| A．①② B．③④ C．①③ D．②④ |
| 下列关于电泳的说法，哪一项是正确的？ |
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| A．电泳是指不带电的分子在电场的作用下发生迁移的过程 B．电泳的过程要在一定的pH下，所以一定要使用缓冲液 C．葡聚糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳是两种常用的电泳方法 D．聚丙烯酰胺凝胶电泳中，溶液中加入十二烷基硫酸钠(SDS)，电泳的迁移率主要取决于分子所带电荷的多少和分子相对分子量的大小 |
| SDS―聚丙烯酰胺凝胶电泳中决定蛋白质或多肽移动速度的主要因素是 |
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| A．蛋白质分子所带的电荷 B．蛋白质分子的形状 C．蛋白质分子的相对分子质量 D．缓冲溶液的pH |
| 样品的加入和洗脱的操作不正确的是 |
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| A．加样前，打开色谱柱下端的流出口，使柱内凝胶面上的缓冲液缓慢下降到凝胶面的下面 B．加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内 C．等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口 D．用吸管小心地将1mL透析后的样品加到色谱柱的顶端 |
| 在血红蛋白分离过程中，如果红色区带歪曲、散乱、变宽，与其有关的是 |
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| A．血红蛋白释放 B．色谱柱的装填 C．洗脱过程 D．样品的处理 |
| 电泳技术可分离和分析氨基酸和核苷酸等有机物。下图是把含有21个氨基酸的多肽进行水解，将氨基酸混合物进行电泳的结果。据图分析该多肽由几种氨基酸组成？ |
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| A．6种 B．4种 C．5种 D．3种 |
| 运用凝胶色谱法分离蛋白质时，所用的凝胶的化学本质是 |
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| A．糖类化合物 B．脂质 C．蛋白质 D．核酸 |
| 高温灭菌和酒精灭菌分别利用了蛋白质的何种性质，结果是什么被破坏所致？ |
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| A．变性、变性、空间结构 B．分解、变性、肽键 C．变性、变性、平面结构 D．分解、分解、肽键 |
| PCR技术可扩增DNA分子，电泳技术是将待测样品放在光滑的凝胶薄膜上，并加上直流电场，可利用分子带电荷不同来分离和分析氨基酸和多核苷酸片段等有机物。这两项技术综合应用于现代刑侦，可以获得最可靠的证据。下图是一次寻找嫌犯的测试结果：图甲是把遗迹中含有21个氨基酸的多肽进行水解，将氨基酸混合物进行电泳的结果；图乙是通过提取罪犯B遗迹DNA和四位嫌犯的DNA进行扩增，并采用特定限制酶处理后进行电泳所得到的一组DNA指纹图谱。 |
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| (1)在同一电场下，由于蛋白质或DNA的_________以及_________不同而产生不同的迁移方向或速度，从而实现样品的分离。 (2)在电泳过程中，带电分子会向着_________的电极移动。 (3)由图甲得知，多肽由_________种氨基酸组成；由图乙可知B最可能的对象是_________。 |
| 随着分子生物学的发展，人们越来越重视对蛋白质的研究。测定蛋白质的相对分子质量是研究蛋白质的一项重要技术，常用的测定方法是凝胶(由多孔性网状物质构成的颗粒，其孔能让小分子物质进出)过滤法，即在一根垂直的玻璃柱中装满凝胶，然后在其上端加入蛋白质混合液并用缓冲液进行洗脱。根据各种蛋白质洗脱的先后顺序可以比较它们的相对分子质量大小。不同蛋白质相对分子质量大小与洗脱液体积的关系如下图所示。请回答下列问题： |
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| (1)蛋白质的基本单位是___________，其结构通式为__________。 (2)把含有肌红蛋白(相对分子质量为16900)、血清蛋白(相对分子质量为68500)、牛乳球蛋白(相对分子质量为35000)、牛胰岛素(相对分子质量为5700)的蛋白质混合液进行凝胶过滤，最先洗脱出来的是______。 (3)某人欲用凝胶过滤法比较A、B两种蛋白质的分子量大小，请你选择需要的材料，帮助其设计实验步骤，并预测实验结果，以得出相关结论。 实验步骤：_____________________________。 实验结果：_____________________________。 (4)若由凝胶过滤法测得某一由2条肽链构成的蛋白质的相对分子质量为m，且已知氨基酸的平均相对分子质量为n，则该蛋白质是由_________个氨基酸经脱水缩合而成的。 |
