| 近十年来，PCR技术(多聚酶链式反应)成为分子生物学实验室里的一种常规手段，其原理是利用DNA半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图)，在很短的时间内，将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍，使实验室所需要的遗传物质不再受限于活的生物体。 |
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| (1)加热使DNA双链打开，这一步是打开________键，称为__________。 (2)当温度降低时，引物与模板________端结合，在DNA聚合酶的作用下，引物沿模板延伸，最终合成两个DNA分子，此过程中原料是__________，遵循的原则是__________。 (3)PCR技术的必要条件，除了模板、原料、ATP、酶以外，至少还需要三个条件，即液体环境、适宜的________和________，前者由PCR仪自动调控，后者则靠________来维持。 |
| DNA的复制需要引物，其主要原因是 |
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| A．可加快DNA的复制速度 B．引物可与DNA母链通过碱基互补配对结合 C．引物的5′端有助于DNA聚合酶延伸DNA链 D．DNA聚合酶只能从3′端延伸DNA链 |
| PCR技术控制DNA的解聚与结合是利用DNA的 |
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| A．特异性 B．稳定性 C．热变性 D．多样性 |
| PCR一般要经过三十多次循环，从第二轮循环开始，上一次循环的产物也作为模板参与反应，由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链作模板时 |
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| A．仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸 B．与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸 C．同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸 D．无需与引物结合，在酶的作用下从头合成子链 |
| 引物的作用是 |
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| A．打开DNA双链 B．催化合成DNA子链 C．使DNA聚合酶能够从引物的3′端开始复制 D．提供模板 |
| 在PCR实验操作中，下列说法不正确的是 |
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| A．在微量离心管中添加各种试剂时，只需一个枪头 B．离心管的盖子一定要盖严，防止液体外溢 C．用手指轻弹离心管壁的目的是使反应液充分混合 D．离心的目的是使反应液集中在离心管底部，提高反应效果 |
| PCR实验中使用的微量离心管、缓冲溶液以及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是 |
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| A．反复洗涤 B．用酒精擦洗 C．高压灭菌 D．在-20℃储存 |
| PCR的含义是 |
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| A．亲子代反应技术 B．多聚酶链式反应 C．DNA片段的复制 D．DNA序列测定 |
| 符合PCR技术反应条件的一项是 ①稳定的缓冲溶液环境 ②DNA模板 ③合成引物 ④四种脱氧核甘酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥解旋酶 ⑦温控设备 |
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| A．①②③④⑤⑥ B．①②③④⑤⑥⑦ C．③④⑤⑥⑦ D．①②③④⑤⑦ |
| 标准的PCR技术过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是 |
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| A．92℃、50℃、72℃ B．72℃、50℃、92℃ C．50℃、92℃、72℃ D．80℃、50℃、72℃ |
| 经过DNA聚合酶作用后形成的化学键是 |
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| A．氢键 B．磷酸二酯键 C．肽键 D．高能磷酸键 |
| TaqDNA聚合酶的特点是 |
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| A．耐高温 B．耐强酸 C．耐强碱 D．不耐热 |
| PCR技术最突出的优点是 |
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| A．原理简单 B．原料易找 C．TaqDNA聚合酶具有耐热性 D．快速、高效、灵活、易于操作 |
| 下列关于DNA聚合酶催化合成DNA子链的说法中，正确的是 |
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| A．以DNA为模板，使DNA子链从5’端延伸到3’端的一种酶 B．TaqDNA聚合酶必须在每次高温变性处理后再添加 C．DNA聚合酶能特异性地复制整个DNA的全部序列 D．TaqDNA聚合酶是从深海生态系统中发现的 |
| DNA复制过程的前提条件是 |
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| A．获得引物 B．催化合成DNA子链 C．解旋 D．四种脱氧核苷酸 |
| PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。防止污染的办法不包括 |
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| A．将样品的处理、配制PCR反应液、PCR循环扩增及PCR产物的鉴定等步骤分区或分室进行 B．吸样枪吸样要慢，吸样时尽量一次性完成，枪头小套、小离心管应一次性使用，以免交叉污染 C．所有的PCR试剂都应放置于大瓶分装，以减少重复加样次数，避免污染机会 D．PCR试剂、PCR反应液应与样品及PCR产物分开保存，不应放于同一冰盒或同一冰箱 |
| 根据教材知识，回答下列问题。 (1)PCR利用了DNA的_______原理，在_______的温度范围内，DNA的_______解体，_______分开，这个过程称为_______。 (2)PCR反应需要的条件：缓冲溶液、DNA模板、引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA聚合酶，其原因是____________。 (3)在PCR反应中与解旋酶作用相同的操作是___________。 (4)PCR一般要经过三十多次循环，每次循环可分为________、________和_________三步。 (5)若扩增30次，产生DNA片段________个。 |
| 下列关于DNA复制过程的正确顺序是 ①互补碱基对之间氢键断裂 ②互补碱基对之间形成氢键 ③DNA分子在解旋酶的作用下解旋 ④以解旋后的母链为模板进行碱基互补配对 ⑤子链与母链盘绕成双螺旋结构 |
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| A．①③④②⑤ B．①④②⑤③ C．①③⑤④② D．③①④②⑤ |
| 下列有关PCR反应的叙述中，正确的是 |
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| A．PCR反应所需要的引物只是RNA B．PCR反应所需要的材料是核糖核苷酸 C．PCR反应所需要的酶在60℃会变性 D．PCR反应需要在一定的缓冲溶液中进行 |
| 关于DNA片段PCR扩增实验的描述中不正确的是 |
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| A．加入的TaqDNA聚合酶耐高温 B．不同大小DNA在电场中迁移速率不同 C．此过程需要DNA连接酶 D．扩增区域由两种引物来决定 |
| 下列关于PCR引物的说法，不正确的是 |
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| A．引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补，并能引导模板DNA的互补链合成的(脱氧)核苷酸序列 B．引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得 C．DNA聚合酶只能使DNA链从引物的3′端开始向引物的5′端延伸 D．引物的3′端必须具有游离的―OH基团 |
| 一个由32P标记的DNA分子，放在未标记的环境中培养，复制5次后标记的DNA分子占DNA分子总数的 |
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| A．1/10 B．1/16 C．1/25 D．1/32 |
| PCR仪实质上是一台自动调控温度的仪器，它调控不同温度的目的是 ①95℃，使DNA分子变性，失去生物活性 ②95℃，使DNA分子变性，解开螺旋 ③55℃，使DNA分子开始复制、延伸 ④55℃，使DNA分子恢复双螺旋结构，恢复活性 ⑤72℃，使DNA分子开始复制、延伸 ⑥72℃，使DNA分子恢复双螺旋结构，恢复活性 |
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| A．①③⑤ B．②③⑤ C．②④⑤ D．②④⑥ |
| PCR操作中，从第二轮循环开始扩增的DNA片段 |
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| A．固定长度 B．一端固定 C．都不固定 D．不能确定 |
| 使用PCR仪的具体实验操作顺序应为 ①设计好PCR仪的循环程序 ②按配方准备好各组分 ③用微量移液器在微量离心管中依次加入各组分 ④进行PCR反应 ⑤离心使反应液集中在离心管底部 |
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| A．②③⑤④① B．①⑤③②④ C．②③⑤①④ D．④②⑤③① |
| 在PCR扩增实验中，引物是很重要的。下列属于引物特点的是 ①引物长度一般是80～100个碱基对(bp)为宜 ②引物的(G+C)/(A+T)含量一般为40%～60% ③引物3′端不能有3个以上连续相同的碱基 ④引物自身不能含有互补序列 |
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| A．①② B．③④ C．①③ D．②④ |
| 在PCR扩增DNA的实验中，根据设计，一分子DNA经30次循环后，应得到约230个DNA分子，但结果只有约210个DNA分子。出现该现象的原因可能是 ①循环次数不够 ②TaqDNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制 ③引物不能与亲链结合 ④系统设计欠妥 |
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| A．①②③ B．②③④ C．①③④ D．①②④ |
| 在PCR扩增实验中，加入一种提取物(一种模板DNA片段)，但实验得到的产物却有两种DNA。其原因可能是 |
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| A．基因突变 B．TaqDNA聚合酶发生变异 C．基因污染 D．温度过高 |
| DNA扩增过程中，DNA片段经若干次扩增，其数目的理论值变化应与下图中_______相符。 |
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A． B．  C．  D．  |
| 某考古学家在西伯利亚泰加林地区的冰中发现了一种冰冻的已灭绝的巨型动物的肌肉。他想了解该巨型动物的DNA与现今印度大象的DNA的相似性，于是做了如下检测工作。其中正确的操作步骤及顺序是 ①降低温度，检测处理后的杂合DNA双链 ②通过PCR技术扩增巨型动物和大象的DNA ③把巨型动物的DNA导入大象的细胞中 ④在一定温度条件下，将巨型动物和大象的DNA水浴共热 |
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| A．②④③ B．②④③① C．③④① D．②④① |
| 根据下面的材料，回答问题： 美国科学家穆里斯发明的PCR技术，是一种DNA分子“复印机”，它可以在数小时内将一个DNA分子复制出1千亿个，解决了检测样本扩增的难题。在人类基因组计划实施中，PCR技术使每个核苷酸的识别成本降至5～10美元。穆里斯因发明PCR技术荣获了诺贝尔奖。 (1)DNA分子在复制时需要大量的____作原料，在DNA聚合酶的催化下以解旋后的单链DNA为______，进行生物合成。 (2)在DNA分子解旋时必须加热，普通的酶容易_______，而耐93℃左右高温的TaqDNA聚合酶的发现，解决了酶重复使用的难题，使链式反应成为可能。每次循环可以分为________、_______、________三步。 (3)耐高温酶的发现和应用说明了地球生物_______的重要性，大自然的______库是人类的宝贵财富。 |
| 阅读下列文字，回答以下问题：PCR是一种具有选择性的体外扩增DNA片段的方法。其特异性由两个人工合成的引物DNA序列决定。所谓引物是指与待扩增核酸片段两端互补的寡核苷酸，其本质是ssDNA(单链DNA)片段。 (1)PCR的引物为___________。 (2)现有一段DNA序列  如果它的引物Ⅰ为5'GGA―OH，则引物Ⅱ为_____________。(3)如果用32P对模板进行标记，扩增20次后，含标记的DNA分子占总数的_____________。 |
| 请根据以下图表回答问题： |
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| (1)在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，其最主要的特点是_____________。 (2)PCR过程中复性温度必须根据引物的碱基数量和种类来设定。表为根据模板设计的两对引物序列，图为引物对与模板结合示意图。请判断哪一对引物可忍耐较高的复性温度？___________。 |
